Go raibh maith agat as cuairt a thabhairt ar Nature.com.Tá tacaíocht teoranta CSS ag an leagan brabhsálaí atá in úsáid agat.Chun an taithí is fearr a fháil, molaimid duit brabhsálaí nuashonraithe a úsáid (nó Mód Comhoiriúnachta a dhíchumasú in Internet Explorer).Idir an dá linn, chun tacaíocht leanúnach a chinntiú, cuirfimid an suíomh gan stíleanna agus JavaScript.
Is parasite protozoan intracellular é Toxoplasma gondii a mhodhnaíonn micrea-thimpeallacht an óstaigh ionfhabhtaithe agus is eol go bhfuil baint aige le minicíocht fáis siadaí inchinne.Sa staidéar seo, déanaimid hipitéis go gcuireann miRNA-21 exosomal ó ionfhabhtú Tocsoplasma fás siadaí inchinn chun cinn.Sainaithníodh eiseasóim ó mhicroglia BV2 ionfhabhtaithe le Tocsoplasma agus deimhníodh inmheánú cealla glioma U87.Rinneadh anailís ar phróifílí slonn microRNA exosomal ag baint úsáide as eagair de microRNA agus microRNA-21A-5p a bhaineann le Toxoplasma gondii agus sórtáil siadaí.Rinneamar imscrúdú freisin ar na leibhéil mRNA de ghéinte a bhaineann le siadaí i gcealla glioma U87 trí leibhéil miR-21 in eiseasóim a athrú agus éifeacht eiseasóim ar iomadú cille glioma U87 daonna.I exosomes de chealla glioma U87 atá ionfhabhtaithe le Toxoplasma gondii, méadaítear léiriú microRNA-21 agus laghdaítear gníomhaíocht géinte antitumor (FoxO1, PTEN, agus PDCD4).Spreagann eiseasóim díorthaithe BV2 atá ionfhabhtaithe le Tocsoplasma iomadú cealla glioma U87.Spreagann eiseasóim fás ar chealla U87 i múnla meall luiche.Molaimid go bhféadfadh ról tábhachtach a bheith ag méadú miR-21 exosomal i miocroglia BV2 ionfhabhtaithe le Tocsoplasma mar thionscnóir fáis cille i gcealla glioma U87 trí ghéinte frith-tumóra a íosrialáil.
Meastar gur diagnóisíodh níos mó ná 18.1 milliún cás ard-ailse ar fud an domhain in 2018, agus diagnóisíodh thart ar 297,000 siadaí lárchóras na néaróg gach bliain (1.6% de na siadaí ar fad)1.Léiríodh i dtaighde roimhe seo go bhfuil táirgí ceimiceacha éagsúla, stair teaghlaigh, agus radaíocht ianaíoch ó threalamh teiripeach agus diagnóiseach ceann san áireamh sna fachtóirí riosca chun siadaí inchinn daonna a fhorbairt.Mar sin féin, ní fios cén chúis chruinn atá leis na hurchóidí seo.Oibreáin ionfhabhtaíocha, lena n-áirítear víris, baictéir agus seadáin3,4 is cúis le thart ar 20% de na hailsí go léir ar fud an domhain.Cuireann pataiginí ionfhabhtaíocha isteach ar mheicníochtaí géiniteacha na cille ósta, amhail deisiú DNA agus timthriall na gceall, agus is féidir athlasadh ainsealach agus damáiste don chóras imdhíonachta a bheith mar thoradh orthu5.
Is iad gníomhairí ionfhabhtaíocha a bhaineann le hailse an duine na pataiginí víreasacha is coitianta, lena n-áirítear víris papilloma daonna agus víris heipitíteas B agus C.Is féidir ról féideartha a bheith ag paraisítí freisin i bhforbairt ailse an duine.Tá baint ag roinnt speiceas parasite, eadhon Schistosoma, Opishorchis viverrini, O. felineus, Clonorchis sinensis agus Hymenolepis nana, le cineálacha éagsúla ailse daonna 6,7,8.
Is protozoan intracellular é Toxoplasma gondii a rialaíonn micri-thimpeallacht na gcealla óstaigh ionfhabhtaithe.Meastar go ndéanann an seadán seo ionfhabhtú a dhéanamh ar thart ar 30% de dhaonra an domhain, rud a chuireann an daonra iomlán i mbaol9,10.Is féidir le tocsoplasma gondii orgáin ríthábhachtacha a ionfhabhtú, lena n-áirítear an lárchóras néaróg (CNS), agus bíonn sé ina chúis le tinnis thromchúiseacha cosúil le meiningíteas marfach agus einceifilíteas, go háirithe in othair imdhíonachta9.Mar sin féin, is féidir le Toxoplasma gondii comhshaol an óstaigh ionfhabhtaithe a athrú freisin trí fhás cille agus freagairtí imdhíonachta a mhodhnú i ndaoine aonair atá in ann imdhíonachta, rud a fhágann go gcoimeádtar ionfhabhtú ainsealach asymptomatic9,11.Is díol suntais é, i bhfianaise an chomhghaolmhaireachta idir leitheadúlacht T. gondii agus minicíocht siadaí inchinne, tugann roinnt tuarascálacha le fios go bhfuil athruithe timpeallachta óstacha in vivo mar gheall ar ionfhabhtú ainsealach T. gondii cosúil le micri-thimpeallacht an siadaí.
Tugtar cumarsáidí idircheallacha ar eiseasóim a sheachadann ábhar bitheolaíoch, lena n-áirítear próitéiní agus aigéid núicléacha, ó chealla comharsanacha16,17.Is féidir le heiseasóim tionchar a imirt ar phróisis bhitheolaíocha a bhaineann le meall, mar shampla frith-apoptosis, angiogenesis, agus metastasis i micri-thimpeallacht an meall.Go háirithe, tá miRNAs (miRNAs), RNAanna beaga neamhchódaithe thart ar 22 núicléitídí ar fad, ina rialtóirí géine iar-thscríbhinní tábhachtacha a rialaíonn níos mó ná 30% de mRNA daonna tríd an gcoimpléasc tosta arna spreagadh ag miRNA (miRISC).Is féidir le Toxoplasma gondii cur isteach ar phróisis bhitheolaíocha trí léiriú miRNA a rialú in óstaigh ionfhabhtaithe.Tá comharthaí tábhachtacha i miRNAs óstaigh chun próisis bhitheolaíocha óstaigh a rialáil chun straitéis marthanais an pharasite a bhaint amach.Mar sin, is féidir le staidéar a dhéanamh ar athruithe i bpróifíl miRNA an óstaigh ar ionfhabhtú le T. gondii cabhrú linn an t-idirghníomhú idir an t-óstach agus T. gondii a thuiscint níos soiléire.Go deimhin, Thirugnanam et al.Mhol 15 go gcuireann T. gondii carcanaigineas inchinne chun cinn trína léiriú ar miRNAs óstacha sonracha a bhaineann le fás siadaí a athrú agus fuarthas amach gur féidir le T. gondii gliomas a chur faoi deara in ainmhithe turgnamhacha.
Díríonn an staidéar seo ar athrú miR-21 eiseasómach i microglia óstaigh atá ionfhabhtaithe le Tocsoplasma BV2.Thugamar faoi deara go bhféadfadh ról a bheith ag miR-21 eiseasómach athraithe i bhfás na gcealla glioma U87 mar gheall ar choinneáil i núicléas FoxO1/p27, arb é an sprioc atá aige ná miR-21 ró-bhrúite.
Fuarthas eiseasóim a dhíorthaítear ó BV2 trí lártheifneoiriú difreálach a úsáid agus bailíochtaíodh iad trí mhodhanna éagsúla chun éilliú le comhpháirteanna ceallacha nó vesicles eile a chosc.Léirigh leictreafóiréis glóthach SDS-polyacrylamide (SDS-PAGE) patrúin ar leith idir próitéiní a bhaintear as cealla BV2 agus exosomes (Fíor 1A), agus rinneadh measúnú ar shamplaí le haghaidh láithreacht Alix, a ndearnadh anailís orthu ag blotting an Iarthair de mharcóirí próitéine eosómacha i .Fuarthas lipéadú Alix i bpróitéiní exosome ach ní i bpróitéiní lysate cille BV2 ( Fíor. 1 B ).Ina theannta sin, rinneadh anailís ar RNA íonaithe ó eiseasóim a dhíorthaítear ó BV2 trí úsáid a bhaint as bithanailíseoir.Is annamh a breathnaíodh fo-aonaid ribosómacha 18S agus 28S i bpatrún imirce RNA exosomal, rud a léiríonn íonacht iontaofa (Fíor 1C).Ar deireadh, léirigh micreascópacht leictreon tarchurtha go raibh na exosomes breathnaíodh thart ar 60-150 nm i méid agus go raibh cupán-mhaith struchtúr tipiciúil de mhoirfeolaíocht exosome ( Fíor. 1 D ).
Tréithriú eiseasóim a dhíorthaítear ó chealla BV2.(A) Leathanach bileog sonraí sábháilteachta.Rinneadh próitéiní a leithlisiú ó chealla BV2 nó eiseasóim a dhíorthaítear ó BV2.Tá difríocht idir patrúin próitéine idir cealla agus eiseasóim.(B) Anailís blot an Iarthair ar mharcóir eiseasómach (Alix).(C) Measúnú ar RNA íonaithe ó chealla BV2 agus eiseasóim díorthaithe BV2 ag baint úsáide as bithanailíseoir.Mar sin, is annamh a aimsíodh fo-aonaid ribosómacha 18S agus 28S i gcealla BV2 in RNA eiseasómach.(D) Thaispeáin micreascópacht leictreoin tarchurtha go raibh eiseasóim scoite ó chealla BV2 dhaite go diúltach le 2% aicéatáit úráinil.Tá eiseasóim thart ar 60-150 nm i méid agus cruth cupán (Song and Jung, sonraí neamhfhoilsithe).
Breathnaíodh inmheánú ceallach eiseasóim díorthaithe BV2 isteach i gcealla glioma daonna U87 ag baint úsáide as micreascópacht chomhfhócasach.Tá eiseasóim lipéadaithe PKH26 logánta i gcíteaplasma cealla U87.Bhí dhaite núicléi le DAPI (Fíor 2A), rud a thugann le fios gur féidir le cealla óstach exosomes a dhíorthaítear BV2 a inmheánú agus tionchar a imirt ar thimpeallacht na gcealla faighteora.
Inmheánú eiseasóim díorthaithe BV2 isteach i gcealla glioma U87 agus eiseasóim díorthaithe BV2 atá ionfhabhtaithe le Tocsoplasma RH iomadú spreagtha ar chealla glioma U87.(A) Eisceasóim gafa ag cealla U87 arna thomhas ag micreascópacht chomhfhócasach.Goradh cealla glioma U87 le heiseasóim a bhí lipéadaithe le PKH26 (dearg) nó gan smacht ar feadh 24 uair an chloig.Bhí na núicléis dhaite le DAPI (gorm) agus ansin breathnaíodh iad faoi mhicreascóp comhfhócasach (barra scála: 10 μm, x 3000).(B) Rinneadh iomadú cille U87 glioma a chinneadh trí mheasúnacht iomadú cille.Cóireáladh cealla glioma U87 le heiseasóim ar feadh na tréimhse sonraithe. * Fuarthas P < 0.05 trí thástáil t an Mhic Léinn. * Fuarthas P < 0.05 trí thástáil t an Mhic Léinn. *P < 0,05 uair an chloig ar an gcrannchur. *P < 0.05 trí thástáil t an mhic léinn. *P < 0.05 通过学生t检验获得. *P < 0.05 * P < 0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P < 0.05 faighte ag baint úsáide as t-thástáil an Mhic Léinn.
Tar éis inmheánú eiseasóim díorthaithe BV2 isteach i gcealla glioma U87 a dhearbhú, rinneamar measúnuithe iomadú cille chun imscrúdú a dhéanamh ar ról na n-eiseosóim atá díorthaithe ó BV2 i bhforbairt cealla glioma daonna.Léirigh cóireáil ar chealla U87 le heiseasóim ó chealla BV2 T. gondii-ionfhabhtaithe go raibh iomadú i bhfad níos airde de chealla U87 mar thoradh ar eiseasóim T. gondii-ionfhabhtaithe BV2 i gcomparáid le rialú (Fíor 2 B).
Ina theannta sin, bhí na torthaí céanna ag fás na gcealla U118 agus U87, toisc go raibh na leibhéil iomadú is airde ag Tocsoplasma mar thoradh ar eiseasóim spreagtha (sonraí nach bhfuil léirithe).Bunaithe ar na sonraí seo, is féidir linn a chur in iúl go bhfuil ról tábhachtach ag eiseasóim ionfhabhtaithe Tocsoplasma-díorthaithe BV2 in iomadú cille glioma.
Chun imscrúdú a dhéanamh ar éifeacht eiseasóm díorthaithe BV2 atá ionfhabhtaithe le Tocsoplasma ar fhorbairt siadaí, rinneamar cealla glioma U87 a instealladh isteach i lucha nude le haghaidh samhail xenograft agus instealladh eiseasóim díorthaithe BV2 nó exosomes díorthaithe BV2-ionfhabhtaithe RH.Tar éis tumaí a bheith le feiceáil tar éis 1 seachtaine, roinntear gach grúpa turgnamhach de 5 lucha de réir mhéid an meall chun an pointe tosaigh céanna a chinneadh, agus tomhaiseadh méid meall ar feadh 22 lá.
I lucha leis an tsamhail xenograft U87, breathnaíodh méid agus meáchan siadaí i bhfad níos mó sa ghrúpa exosome RH-ionfhabhtaithe BV2-díorthaithe ag lá 22 (Fíor 3 A, B).Ar an láimh eile, ní raibh aon difríocht shuntasach i méid siadaí idir an grúpa exosome díorthaithe BV2 agus an grúpa rialaithe tar éis cóireála exosome.Ina theannta sin, léirigh lucha a bhí instealladh le cealla glioma agus eiseasóim an méid meall is mó sa ghrúpa de exosomes díorthaithe BV2-ionfhabhtaithe RH (Fíor 3 C).Léiríonn na torthaí seo go spreagann eiseasóim atá ionfhabhtaithe le Tocsoplasma de bhun BV2 fás glioma i múnla meall luiche.
Oncogenesis (AC) de eiseasóim díorthaithe BV2 i múnla luiche xenograft U87.Méadaíodh méid meall (A) agus meáchan (B) go suntasach i lucha nude BALB/c cóireáilte le heiseasóim RH-ionfhabhtaithe díorthaithe ó BV2.Instealladh lucha nude BALB/c (C) go subcutaneously le 1 x 107 cealla U87 ar fionraí i meascán Matrigel.Sé lá tar éis an insteallta, cuireadh cóireáil ar 100 μg de eiseasóim díorthaithe BV2 i lucha.Tomhaiseadh méid agus meáchan meall ar na laethanta sonraithe agus tar éis íobairt, faoi seach. *P < 0.05. *P < 0.05. * Р < 0,05. *P < 0.05. *P < 0.05. *P < 0.05. * Р < 0,05. *P < 0.05.
Léirigh na sonraí go raibh athrú suntasach tagtha ar 37 miRNAs (16 overexpressed agus 21 downexpressed) a bhaineann le díolúine nó forbairt meall i microglia tar éis ionfhabhtú leis an brú Tocsoplasma RH ( Fíor. 4 A ).Deimhníodh leibhéil choibhneasta léirithe miR-21 i measc miRNAs athraithe ag RT-PCR fíor-ama in eiseasóim a dhíorthaítear ó BV2, eiseasóim cóireáilte le cealla BV2 agus U87.Léiriú miR-21 léirigh méadú suntasach i exosomes ó chealla BV2 ionfhabhtaithe le Toxoplasma gondii (RH brú) (Fig. 4 B).Mhéadaigh leibhéil choibhneasta léirithe miR-21 i gcealla BV2 agus U87 tar éis glacadh le heiseasóim athraithe (Fíor 4 B).Bhí na leibhéil choibhneasta de léiriú miR-21 i bhfíocháin inchinn na n-othar meall agus lucha ionfhabhtaithe le Toxoplasma gondii (brú ME49) níos airde ná i rialuithe, faoi seach (Fíor 4 C).Tá comhghaol idir na torthaí seo agus difríochtaí idir leibhéil slonn na microRNAs tuartha agus deimhnithe in vitro agus in vivo.
Athruithe ar léiriú miP-21a-5p exosomal i microglia atá ionfhabhtaithe le Toxoplasma gondii (RH).(A) Léiríonn athruithe suntasacha i siRNA a bhaineann le díolúine nó forbairt siadaí tar éis ionfhabhtú T. gondii RH.(B) Braitheadh ​​leibhéil choibhneasta slonn miR-21 ag RT-PCR fíor-ama in eiseasóim díorthaithe BV2, eiseasóim cóireáilte BV2, agus cealla U87.(C) Fuarthas leibhéil choibhneasta slonn miR-21 i bhfíocháin inchinne othar siadaí (N=3) agus i lucha a bhí ionfhabhtaithe le Toxoplasma gondii (préine ME49) (N=3). * Fuarthas P < 0.05 trí thástáil t an Mhic Léinn. * Fuarthas P < 0.05 trí thástáil t an Mhic Léinn. *P < 0,05 uair an chloig получено с помощью t-критерия Стьюдента. *Fuarthas P <0.05 trí úsáid a bhaint as t-thástáil an Mhic Léinn. *P < 0.05 通过学生t检验获得. *P < 0.05 *P <0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P < 0.05 faighte ag baint úsáide as t-thástáil an Mhic Léinn.
Mar thoradh ar eiseasóim ó chealla BV2 a bhí ionfhabhtaithe le RH, tháinig fás ar gliomas in vivo agus in vitro (Fíor 2, 3).Chun mRNAanna ábhartha a bhrath, rinneamar scrúdú ar leibhéil mRNA de spriocghéin antitumor, bosca ceann forc O1 (FoxO1), PTEN, agus bás cille cláraithe 4 (PDCD4) i gcealla U87 ionfhabhtaithe le heiseasóim a dhíorthaítear ó BV2 nó RH BV2.Tá sé léirithe ag anailís bhithfhaisnéisíochta go bhfuil suíomhanna ceangailteacha miR-2121,22 ag roinnt géinte a bhaineann le siadaí, lena n-áirítear na géinte FoxO1, PTEN, agus PDCD4.Laghdaíodh leibhéil mRNA de spriocghéinte antitumor i eiseasóm díorthaithe BV2 a bhí ionfhabhtaithe le RH i gcomparáid le heiseasóim díorthaithe BV2 (Fíor 5 A).Thaispeáin FoxO1 leibhéil laghdaithe próitéine in eiseasóm díorthaithe BV2 a bhí ionfhabhtaithe le RH i gcomparáid le heiseasóim díorthaithe BV2 (Fíor 5B).Bunaithe ar na torthaí seo, d'fhéadfaimis a dhearbhú go ndéanann eiseasóim a dhíorthaítear ó BV2 atá ionfhabhtaithe le RH laghduithe ar ghéinte frith-oncogenic, ag cothabháil a ról i bhfás siadaí.
Cothaíonn eiseasóim atá díorthaithe BV2 atá ionfhabhtaithe le tocsoplasma RH faoi chois géinte antatumóra i gcealla glioma U87 trí eiseasóm díorthaithe BV2 atá ionfhabhtaithe le Tocsoplasma RH.(A) PCR fíor-ama de léiriú FoxO1, PTEN agus PDCD4 i eiseasóim a dhíorthaítear ó T. gondii RH-ionfhabhtaithe BV2 i gcomparáid le exosomes PBS.Baineadh úsáid as mRNA β-actin mar rialú.(B) Socraíodh slonn FoxO1 le blotting an Iarthair agus rinneadh measúnú staitistiúil ar shonraí densitometry ag baint úsáide as an gclár ImageJ. * Fuarthas P < 0.05 trí thástáil t an Mhic Léinn. * Fuarthas P < 0.05 trí thástáil t an Mhic Léinn. *P < 0,05 uair an chloig получено с помощью t-критерия Стьюдента. *Fuarthas P <0.05 trí úsáid a bhaint as t-thástáil an Mhic Léinn. *P < 0.05 通过学生t检验获得. *P < 0.05 *P <0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P < 0.05 faighte ag baint úsáide as t-thástáil an Mhic Léinn.
Chun éifeacht miP-21 in eiseasóim ar rialáil géine a bhaineann le siadaí a thuiscint, aistríodh cealla U87 le coscaire miP-21 ag baint úsáide as Lipofectamine 2000 agus baineadh na cealla 24 uair tar éis aistrithe.Cuireadh leibhéil slonn FoxO1 agus p27 i gcealla a aistríodh le coscairí miR-21 i gcomparáid le cealla a ndearnadh cóireáil orthu le heiseasóim díorthaithe BV2 ag baint úsáide as qRT-PCR (Fíor 6A, B).Rinne aistriú an choscóra miR-21 isteach i gcealla U87 íosrialú suntasach ar abairt FoxO1 agus p27 (FIG. 6).
Athraíodh slonn FoxO1/p27 i gcealla glioma U87;Aistríodh cealla U87 le coscaire miP-21 ag baint úsáide as Lipofectamine 2000 agus baineadh cealla 24 uair tar éis aistrithe.Cuireadh leibhéil slonn FoxO1 agus p27 i gcealla a aistríodh le coscairí miR-21 i gcomparáid le leibhéil i gcealla cóireáilte le heiseasóim díorthaithe BV2 ag baint úsáide as qRT-PCR (A, B).
Chun freagairt imdhíonachta an óstaigh a éalú, athraíonn an parasite Tocsoplasma isteach i gcist fíocháin.Paraisíonn siad fíocháin éagsúla, lena n-áirítear an inchinn, croí, agus muscle cnámharlaigh, ar feadh shaolré an óstaigh agus modhnaíonn siad freagairt imdhíonachta an óstaigh.Ina theannta sin, is féidir leo timthriall cille agus apoptosis na gceall óstach a rialáil, ag cur a n-iomadú chun cinn14,24.Is éard is mó a ionfhabhtaíonn tocsoplasma gondii cealla dendritic óstaigh, neodróifilí, agus lineage monocyte/macrophage, lena n-áirítear microglia inchinn.Cothaíonn Toxoplasma gondii idirdhealú a dhéanamh ar mhacrophages an feinitíopa M2, cuireann sé isteach ar chneasaithe créachta tar éis ionfhabhtú pataigineach, agus baineann sé freisin le hypervascularization agus fiobróis granulomatous.Féadfaidh an pathogenesis iompraíochta seo d’ionfhabhtú Tocsoplasma a bheith bainteach le marcóirí a bhaineann le forbairt meall.Féadfaidh an timpeallacht naimhdeach arna rialú ag Tocsoplasma a bheith cosúil leis an réamhailse comhfhreagrach.Mar sin, is féidir glacadh leis gur cheart go gcuirfeadh ionfhabhtú Tocsoplasma le forbairt tumaí inchinn.Go deimhin, tá rátaí arda ionfhabhtaithe Tocsoplasma tuairiscithe i serum na n-othar a bhfuil siadaí inchinn éagsúla.Ina theannta sin, féadfaidh Toxoplasma gondii a bheith ina éifeachtóir carcanaigineach eile agus gníomhú go sineirgíoch chun cabhrú le carcanaiginí tógálacha eile siadaí inchinn a fhorbairt.Maidir leis seo, is fiú a thabhairt faoi deara go gcuireann víreas P. falciparum agus Epstein-Barr go sineirgisteacha le foirmiú liomfóma Burkitt.
Tá imscrúdú forleathan déanta ar ról na n-easosóim mar rialtóirí i réimse an taighde ailse.Mar sin féin, níl tuiscint mhaith fós ar ról eiseasóim idir paraisítí agus óstaigh ionfhabhtaithe.Go dtí seo, mhínigh rialtóirí éagsúla, lena n-áirítear próitéiní secreted, na próisis bhitheolaíocha trína gcuireann paraisítí protozoan in aghaidh ionsaí óstaigh agus a bhuanaíonn ionfhabhtú.Le déanaí, tá coincheap ag fás go n-idirghníomhaíonn microvesicles a bhaineann le protozoan agus a microRNAs le cealla óstacha chun timpeallacht fhabhrach a chruthú dá maireachtáil.Mar sin, tá gá le tuilleadh staidéir chun an gaol idir miRNAs eiseasómacha athraithe agus iomadú ceall glioma a fháil amach.Ceanglaíonn athrú microRNA (géinte braisle miR-30c-1, miR-125b-2, miR-23b-27b-24-1 agus miR-17-92) leis an tionscnóir STAT3 i macraphages daonna ionfhabhtaithe le tocsoplasma, agus rialaítear é agus spreagann sé frithshuímh. -apoptosis mar fhreagra ar ionfhabhtú Tocsoplasma gondii 29 .Méadaíonn ionfhabhtú tocsoplasma léiriú miR-17-5p agus miR-106b-5p, a bhaineann le roinnt galair hyperproliferative 30 .Tugann na sonraí seo le fios gur móilíní tábhachtacha iad miRNAs óstaigh arna rialú ag ionfhabhtú Tocsoplasma chun go mairfidh seadáin agus pataigineas in iompar bitheolaíoch óstach.
Is féidir le miRNAs athraithe tionchar a imirt ar chineálacha éagsúla iompair le linn thionscnamh agus dul chun cinn cealla urchóideacha, lena n-áirítear gliomas: féin-leordhóthanacht chomharthaí fáis, neamhíogaireacht i leith comharthaí a chuireann bac ar fhás, imghabháil apoptosis, acmhainneacht mhacasamhlú neamhtheoranta, angiogenesis, ionradh agus metastasis, agus athlasadh.I glioma, sainaithníodh miRNAs athraithe i roinnt staidéar próifílithe léirithe.
Sa staidéar reatha, dheimhnigh muid leibhéil arda de léiriú miRNA-21 i gcealla óstaigh tocsoplasma-ionfhabhtaithe.Aithníodh miR-21 mar cheann de na microRNAanna is minice a chuirtear ró-mhinic i siadaí soladacha, lena n-áirítear gliomas, 33 agus tá comhghaol idir a léiriú agus an grád glioma.Tugann fianaise carntha le fios gur oncogene úrscéal é miR-21 a fheidhmíonn mar fhachtóir frith-apoptotic i bhfás glioma agus go bhfuil sé ró-mheasta i bhfíocháin agus i plasma urchóideacha inchinn an duine.Is díol spéise é go spreagann díghníomhú miR-21 i gcealla agus fíocháin glioma cosc ​​ar iomadú cille mar gheall ar apoptóis atá ag brath ar caspase.Nocht anailís bhithfhaisnéiseach ar spriocanna tuartha miR-21 géinte il-suppressor meall a bhaineann le cosáin apoptosis, lena n-áirítear bás cille cláraithe 4 (PDCD4), tropomyosin (TPM1), PTEN, agus bosca ceann forc O1 (FoxO1), leis an suíomh ceangailteach miR-2121..22.38.
Tá FoxO1, mar cheann de na fachtóirí trascríobh (FoxO), páirteach i bhforbairt cineálacha éagsúla ailse daonna agus féadann sé léiriú géinte suppressor meall a rialáil mar p21, p27, Bim, agus FasL40.Is féidir le FoxO1 coscairí timthriall cille mar p27 a cheangal agus a ghníomhachtú chun fás cille a chosc.Ina theannta sin, tá FoxO1 ina phríomhéifeachtaí ar chomharthaíocht PI3K/Akt agus rialaíonn sé go leor próisis bhitheolaíocha ar nós dul chun cinn timthriall cille agus difreáil cille trí ghníomhachtú trascríobh p2742.
Mar fhocal scoir, creidimid go bhféadfadh ról tábhachtach a bheith ag miR-21 exosomal a dhíorthaítear ó microglia atá ionfhabhtaithe le Tocsoplasma mar rialtóir fáis ar chealla glioma (Fíor 7).Mar sin féin, tá gá le tuilleadh staidéir chun nasc díreach a aimsiú idir miR-21 eiseacha, ionfhabhtú tocsoplasma athraithe, agus fás glioma.Táthar ag súil go dtabharfaidh na torthaí seo pointe tosaigh chun staidéar a dhéanamh ar an ngaol idir ionfhabhtú Tocsoplasma agus minicíocht glioma.
Tá léaráid scéimreach de mheicníocht carcanaigineas glioma (inchinn) molta sa staidéar seo.Tarraingíonn an t-údar isteach PowerPoint 2019 (Microsoft, Redmond, WA).
Bhí na prótacail turgnamhacha go léir sa staidéar seo, lena n-áirítear úsáid na n-ainmhithe, de réir Threoirlínte Caighdeánacha Eitice an Choiste um Chúram Ainmhithe agus Úsáideoirí Ollscoil Náisiúnta Seoul agus faomhadh iad ag Bord Athbhreithnithe Institiúideach Scoil Leighis Ollscoil Náisiúnta Seoul (uimhir IRB SNU- 150715).-2).Rinneadh na nósanna imeachta turgnamhacha go léir de réir mholtaí ARRIVE.
Saothraíodh microglia luch BV2 agus cealla glioma daonna U87 i Meán-Iolar Athraithe Dulbecco (DMEM; Welgene, Seoul, an Chóiré) agus Meánach Institiúid Cuimhneacháin Pháirc Roswell (RPMI; Welgene), faoi seach, agus bhí serum bó féatais 10% i ngach ceann acu, 4 mM l- glutamine, peinicillin 0.2 mM agus streptomycin 0.05 mM.Saothraíodh cealla i gorlann le 5% CO2 ag 37°C.Baineadh úsáid as líne ceall glioma eile, U118, chun comparáid a dhéanamh le cealla U87.
Chun eiseasóim a leithlisiú ó thanna T. gondii-ionfhabhtaithe RH agus ME49, baineadh tachyzoites T. gondii (brú RH) ó chuas bhoilg lucha BALB/c 6 seachtaine d’aois a instealladh 3-4 lá roimhe sin.Niteadh tachyzoites trí huaire le PBS agus íonghlanadh trí lártheifneoiriú i 40% Percoll (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, SAM)43.Chun tachyzoites de bhrú ME49 a fháil, rinneadh lucha BALB/c a instealladh go hin-peritoneally le 20 cysts fíocháin agus bailíodh claochlú tachyzoite i gcistin trí chuas an bhoilg a ní ar an 6-8ú lá tar éis ionfhabhtú (PI).Lucha atá ionfhabhtaithe le PBS.Fásadh tachyzoites ME49 i gcealla arna bhforlíonadh le 100 μg/ml peinicillin (Gibco/BRL, Grand Island, NY, SAM), streiptimícin 100 μg/ml (Gibco/BRL), agus serum bó féatais 5% (Lonza, Walkersville, MD ) .., SAM) ag 37 °C agus 5% dé-ocsaíd charbóin.Tar éis saothrú i gcealla Vero, cuireadh tachyzoites ME49 ar aghaidh faoi dhó trí shnáthaid 25 tomhsaire agus ansin trí scagaire 5 µm chun smionagar agus cealla a bhaint.Tar éis níocháin, cuireadh na tachyzoites ar fionraí arís i PBS44.Coinníodh cistí fíocháin de brú Tocsoplasma gondii ME49 trí instealladh ionperitoneal de chistíní scoite amach ó inchinn lucha ionfhabhtaithe C57BL/6 (Ionad Bith-Ainmhithe Orient, Seongnam, An Chóiré).Baineadh brains lucha ionfhabhtaithe ME49 tar éis 3 mhí de PI agus mionfheoil iad faoi mhicreascóp chun cistíní a leithlisiú.Coinníodh na lucha ionfhabhtaithe faoi choinníollacha speisialta saor ó phataigin (SPF) ag Scoil Leighis Ollscoil Náisiúnta Seoul.
Baineadh RNA iomlán as eiseasóim díorthaithe BV2, cealla BV2 agus fíocháin ag baint úsáide as an MiRNeasy Mini Kit (Qiagen, Hilden, an Ghearmáin) de réir threoracha an mhonaróra, lena n-áirítear an t-am goir don chéim elution.Cinneadh an tiúchan RNA ar speictreafótaiméadar NanoDrop 2000.Rinneadh measúnú ar cháilíocht na micri-eagair RNA ag baint úsáide as bithanailíseoir Agilent 2100 (Agilent Technologies, Amstelveen, an Ísiltír).
Ullmhaíodh DMEM le 10% de FBS bocht eisíomach trí ultralártheifneoiriú ag 100,000g ar feadh 16 uair ag 4°C agus scagadh trí scagaire 0.22 µm (Nalgene, Rochester, NY, SAM).Saothraíodh cealla BV2, 5 × 105, i DMEM ina raibh 10% de FBS ídithe eisíomach agus 1% antaibheathaigh ag 37°C agus 5% CO2.Tar éis 24 uair an chloig goir, cuireadh tachyzoites de strain RH nó ME49 (MOI = 10) leis na cealla agus baineadh paraisítí neamh-ionracha laistigh d'uair an chloig agus athlíonadh le DMEM.Rinneadh eiseasóim ó chealla BV2 a leithlisiú trí lártheifneoiriú difreálach modhnaithe, an modh is forleithne a úsáidtear.Cuir an millín eisíomach ar fionraí i 300 µl PBS le haghaidh RNA nó anailís próitéine.Cinneadh an tiúchan eiseasóim scoite ag baint úsáide as trealamh measúnaithe próitéin BCA (Pierce, Rockford, IL, SAM) agus speictreafótaiméadar NanoDrop 2000.
Cuireadh deascáin ó chealla BV2 nó eiseasóim a dhíorthaítear ó BV2 i dtuaslagán eastósctha próitéin PRO-PREP™ (Biteicneolaíocht Intron, Seongnam, an Chóiré) agus lódáladh próitéiní ar glóthacha polyacrylamide SDS 10% daite gorm iontach Coomassie.Ina theannta sin, aistríodh próitéiní chuig seicní PVDF ar feadh 2 uair an chloig.Bailíochtaíodh blots an Iarthair ag baint úsáide as antashubstaint Alix (Teicneolaíocht Comharthaíochta Cille, Beverly, MA, SAM) mar mharcóir eiseasómach.Úsáideadh IgG (H + L) frith-luch gabhar comhchuingeach HRP (Bethyl Laboratories, Montgomery, TX, USA) agus anailísí íomhá luminescent LAS-1000 móide (Fuji Photographic Film, Tóiceo, an tSeapáin) mar antashubstaint thánaisteach..Rinneadh micreascópacht leictreon tarchurtha chun staidéar a dhéanamh ar mhéid agus ar mhoirfeolaíocht na n-easosóim.Ullmhaíodh eiseasóim atá scoite ó chealla BV2 (6.40 µg/µl) ar mhogaill brataithe le carbón agus dathaíodh iad go diúltach le aicéatáit úráinil 2% ar feadh 1 nóiméad.Breathnaíodh na samplaí ullmhaithe ag voltas luasghéaraithe 80 kV ag baint úsáide as JEOL 1200-EX II (Tóiceo, an tSeapáin) atá feistithe le ceamara ES1000W Erlangshen CCD (Gatan, Pleasanton, CA, SAM).
Dathaíodh eiseasóim díorthaithe BV2 ag baint úsáide as Kit Nascóirí Fluaraiseachta Dearg PKH26 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, SAM) ar feadh 15 nóiméad ag teocht an tseomra.Goraíodh cealla U87, 2×105, le heasosóim (dearg) lipéadaithe PKH26 nó gan aon eiseasóim mar rialú diúltach ag 37°C ar feadh 24 uair i gorlann 5% CO2.Daiteadh núicléis cille U87 le DAPI (gorm), socraíodh cealla U87 i paraformaildéad 4% ar feadh 15 nóiméad ag 4°C agus ansin rinneadh anailís orthu i gcóras micreascóp comhfhócasach Leica TCS SP8 STED CW (Leica Microsystems, Mannheim, an Ghearmáin).inbhraite.
Rinneadh cDNA a shintéisiú ó siRNA ag baint úsáide as sintéis chéad snáithe Mir-X siRNA agus trealamh SYBR qRT-PCR (Takara Bio Inc., Shiga, an tSeapáin).Rinneadh PCR cainníochtúil fíor-ama ag baint úsáide as an gcóras braite PCR fíor-ama iQ5 (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) ag baint úsáide as primers agus teimpléid measctha le SYBR Premix.Rinneadh DNA a aimpliú ar feadh 40 timthriall dínádúraithe ag 95°C ar feadh 15 s agus anáil ag 60°C ar feadh 60 s.Rinneadh anailís ar na sonraí ó gach imoibriú PCR ag baint úsáide as modúl anailíse sonraí bogearraí an chórais optúla iQ™5 (Bio-Rad).Ríomhadh athruithe coibhneasta i léiriú géine idir spriocghéine roghnaithe agus β-actin/siRNA (agus U6) ag baint úsáide as an modh cuar caighdeánach.Taispeántar na seichimh primer a úsáideadh i dTábla 1.
Síolaíodh cealla glioma 3 x 104 U87 i bplátaí tobair 96 agus meascadh iad le heiseasóim ionfhabhtaithe Tocsoplasma díorthaithe ó BV2 (50 μg / mL) nó eiseasóim neamhpulse díorthaithe ó BV2 (50 μg / mL) mar rialuithe ag 12, 18 agus 36 uair an chloig. .Socraíodh an ráta iomadaithe cille ag baint úsáide as an Kit Comhaireamh Cille-8 (Dojindo, Kumamoto, an tSeapáin) (Figiúirí Forlíontacha S1-S3) 46 .
Ceannaíodh lucha nude baineanna 5 seachtaine BALB/c ó Orient Bio (Seongnam-si, An Chóiré Theas) agus coinníodh iad ina n-aonar i gcliabháin steiriúla ag teocht an tseomra (22±2°C) agus taise (45±15°C).%) ag teocht an tseomra (22±2°C) agus taise (45±15%).Rinneadh timthriall solais 12 uair an chloig agus timthriall dorcha 12 uair an chloig faoi SPF (Ionad Ainmhithe Scoil Leighis Ollscoil Seoul).Roinneadh lucha go randamach i dtrí ghrúpa de 5 lucha an ceann agus rinneadh gach grúpa a instealladh go subcutaneously le 400 ml de PBS ina raibh cealla glioma 1 x 107 U87 agus fachtóir fáis laghdaithe BD Matrigel™ (BD Science, Miami, FL, SAM).Sé lá tar éis instealladh siadaí, rinneadh 200 mg de eiseasóim a dhíorthaítear ó chealla BV2 (le/gan ionfhabhtú Tocsoplasma) a instealladh isteach sa suíomh meall.Fiche lá tar éis ionfhabhtú meall, tomhaiseadh méid meall na lucha i ngach grúpa le caliper trí huaire sa tseachtain, agus ríomhadh an méid meall de réir na foirmle: 0.5 × (leithead) × 2 × fad.
Anailís slonn MicroRNA ag baint úsáide as eagar miRCURYTM LNA miRNA, tá eagair mmu agus rno den 7ú glúin (EXIQON, Vedbaek, an Danmhairg) a chlúdaíonn 1119 lucha dea-thréithe i measc 3100 tóireadóir gabhála miRNA daonna, luch agus francach.Le linn an nós imeachta seo, baineadh 250 go 1000 ng de RNA iomlán as an 5′-fosfáit trí chóireáil le fosfatás alcaileach intestinal lao agus ina dhiaidh sin lipéadú le dath fluaraiseach glas Hy3.Rinneadh na samplaí lipéadaithe a hibridiú ansin trí shleamhnáin mhicrea-eagair a luchtú ag baint úsáide as trealamh seomra hibridithe (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, SAM) agus trealamh sleamhnáin hibridithe (Agilent Technologies).Rinneadh hibridiú ar feadh 16 uair an chloig ag 56 ° C, ansin nite na micrea-eagair de réir mholtaí an déantóra.Ansin rinneadh na sleamhnáin phróiseáilte microarray a scanadh trí úsáid a bhaint as córas scanóir microarray Agilent G2565CA (Agilent Technologies).Iompórtáladh íomhánna scanta ag baint úsáide as bogearraí Agilent Feature Extraction leagan 10.7.3.1 (Agilent Technologies) agus rinneadh déine fluaraiseachta gach íomhá a chainníochtú ag baint úsáide as an gcomhad GAL comhfhreagrach den phrótacal modhnaithe Exiqon.Tá sonraí microarray don staidéar reatha i dtaisce i mbunachar sonraí GEO faoin uimhir aontachais GPL32397.
Rinneadh anailís ar phróifílí slonn de miRNAs eisosómacha aibí i micriglia de thréanna RH nó ME49 a bhí ionfhabhtaithe le Tocsoplasma ag baint úsáide as uirlisí líonra éagsúla.Aithníodh miRNAs a bhaineann le forbairt siadaí ag baint úsáide as miRWalk2.0 (http://mirwalk.umm.uni-heidelberg.de) agus scagadh amach le déine comhartha normalaithe (log2) níos mó ná 8.0.I measc miRNAs, fuarthas amach go raibh miRNAs a léiríodh go difreálach níos mó ná 1.5-huaire athraithe trí anailís scagaire ar miRNAs arna athrú ag tréithchineálacha RH nó ME49 ionfhabhtaithe le T. gondii.
Síolaíodh cealla i bplátaí sé thobar (3 x 105 cill/tobar) in opti-MEM (Gibco, Carlsbad, CA, SAM) ag baint úsáide as Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA, SAM).Saothraíodh na cealla aistrithe ar feadh 6 huaire agus ansin athraíodh an meán go meán iomlán úr.Baineadh cealla 24 uair tar éis aistrithe.
Rinneadh anailís staitistiúil go príomha trí úsáid a bhaint as t-tástáil Mac Léinn le bogearraí Excel (Microsoft, Washington, DC, SAM).Le haghaidh anailíse ainmhithe turgnamhacha, rinneadh ANOVA dhá-bhealach ag baint úsáide as bogearraí Prism 3.0 (GraphPad Software, La Jolla, CA, USA). Measadh go raibh P-luachanna < 0.05 suntasach go staitistiúil. Measadh go raibh P-luachanna < 0.05 suntasach go staitistiúil. Значения P <0,05 считались статистически значимыми. Measadh go raibh luachanna P <0.05 suntasach go staitistiúil. P 值< 0.05 míle ar shiúl. P 值< 0.05 Значения P <0,05 считались статистически значимыми. Measadh go raibh luachanna P <0.05 suntasach go staitistiúil.
D'fhormheas Bord Athbhreithnithe Institiúideach Scoil Leighis Ollscoil Náisiúnta Seoul (uimhir IRB SNU-150715-2) na prótacail turgnamhacha go léir a úsáideadh sa staidéar seo.
The data used in this study are available upon reasonable request from the first author (BK Jung; mulddang@snu.ac.kr). And the microarray data for the current study is deposited in the GEO database under registration number GPL32397.
Furley, J. et al.An mhinicíocht agus an bhásmhaireacht ailse dhomhanda mheasta in 2018: foinsí agus modhanna GLOBOCAN.Léiriú.J. Ruck 144, 1941–1953 (2019).
Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS Léargas ar fhachtóirí riosca siadaí inchinn agus a n-idirghabhálacha teiripeacha. Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS Léargas ar fhachtóirí riosca siadaí inchinn agus a n-idirghabhálacha teiripeacha.Rashid, S., Rehman, K. agus Akash, MS Athbhreithniú ar fhachtóirí riosca le haghaidh siadaí inchinn agus idirghabhálacha móra teiripeacha. Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS 深入了解脑肿瘤的危险因素及其治疗干预措施. Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS Tuiscint dhomhain ar fhachtóirí riosca siadaí inchinn agus idirghabhálacha teiripeacha.Rashid, S., Rehman, K. agus Akash, MS Athbhreithniú ar fhachtóirí riosca le haghaidh siadaí inchinn agus idirghabhálacha móra teiripeacha.Eolaíocht bithleighis.poitigéir.143, 112119 (2021).
Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. Idirghníomhaíochtaí baictéaracha-víreasacha in ailsí ó chonair ghiniúna an duine orodigestive agus baineann: Achoimre ar fhianaise eipidéimeolaíochta agus saotharlainne. Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. Idirghníomhaíochtaí baictéaracha-víreasacha in ailsí ó chonair ghiniúna an duine orodigestive agus baineann: Achoimre ar fhianaise eipidéimeolaíochta agus saotharlainne.Kato I., Zhang J. agus Sun J. Idirghníomhaíochtaí baictéaracha-víreasacha in ailse an chonair gastrointestinal daonna agus an chonair ghiniúna baineann: achoimre ar shonraí eipidéimeolaíochta agus saotharlainne. Kato, I., Zhang, J. & Sun, J.结. Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. Idirghníomhaíocht bacteriio-viral i díleá cuas béil an duine agus conradh atáirgthe baineann: achoimre ar eolaíocht galar tóir agus fianaise saotharlainne.Kato I., Zhang J. agus Sun J. Idirghníomhaíochtaí baictéaracha-víreasacha in ailse gastrointestinal daonna agus ailse giniúna baineann: achoimre ar shonraí eipidéimeolaíochta agus saotharlainne.Ailse 14, 425 (2022).
Magon, KL & Paróiste, JL Ó ionfhabhtú go hailse: Mar a athraíonn víris meall DNA meitibileacht lárnach charbóin agus lipid cille. Magon, KL & Paróiste, JL Ó ionfhabhtú go hailse: Mar a athraíonn víris meall DNA meitibileacht lárnach charbóin agus lipid cille.Mahon, KL agus Paróiste, JL Ionfhabhtú dóiteáin don ailse: conas a athraíonn víris siadaí DNA-bhunaithe meitibileacht lárnach charbóin agus lipid cille. Magon, KL & Parish, JL Ainm Riarachán:DNA 肿瘤病毒如何改变宿主细胞的中心碳和脂质代。 Magon, KL & Paróiste, JL Ó ionfhabhtú go hailse: an chaoi a n-athraíonn víris siadaí DNA meitibileacht lárnach charbóin agus lipid cille.Mahon, KL agus Paróiste, JL Tineann ionfhabhtú ailse: conas a athraíonn víris siadaí DNA meitibileacht lárnach charbóin agus lipid i gcealla óstaigh.Bitheolaíocht Oscailte.11, 210004 (2021).
Correia da Costa, JM et al.Estrogens catechol scistosomes agus flukes ae agus helminth-bhainteach ailse.tosaigh.te istigh.5, 444 (2014).